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M5 多糖多酚双超mix （MF898）使用“温馨提示”：
——Tips:大豆、番茄具体操作经验请查看最后附录
一、产品说明：
1、根据不同物种的基因组GC/AT含量不同，我们设置了几种2x PCRmix以完成实验。
2、对于常见GC含量均衡物种推荐MF848系列；
3、而对于松树、杨树、棉花、黄瓜等基因组GC含量比较低，推荐MF848-AT；
4、某些海洋生物GC含量非常高，推荐MF848-GC。
5、MF848、MF848-AT、MF848-GC三者唯一的区别就是2x PCR mix不同，其他组分和操作都相同。
6、MF898——多糖多酚物种，茄科、锦葵科、杨柳科、海洋藻类优先考虑，可尝试使用MF848-AT（注意加氯仿操作）
MF848-01 | M5 超光速mix（鼠尾，昆虫，拟南芥，水稻，玉米，小麦等） | 1mL |
MF848-10 | 10x1mL | |
MF848-100 | 100x1mL | |
MF848-AT-01 | M5 高AT物种超光速mix（特指番茄，土豆，棉花，黄瓜，杨树，松树等） | 1mL |
MF848-AT-10 | 10x1mL | |
MF848-AT-100 | 100x1mL | |
MF848-GC-01 | M5 高GC物种超光速mix（特指褐藻，小球藻等） | 1mL |
MF848-GC-10 | 10x1mL | |
MF848-GC-100 | 100x1mL | |
MF898-01 | M5 多糖多酚双超mix（无需提取基因组DNA） | 1mL |
MF898-05 | 5x1mL | |
MF898-10 | 10x1mL |
二、多糖多酚双超mix （MF898）组成
1、裂解液叫“扩增最佳伴侣”（MF859）
2、2x PCR 双超mix
3、ddH2O
三、组分说明与操作建议
1、本产品免基因组DNA提取
“扩增最佳伴侣”的作用是裂解细胞，释放出DNA当模板（请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系）
Tips：
①样本太多：会超出最佳伴侣的处理上限，导致裂解不完全；
②样本太少：会造成模板浓℃过低，导致PCR失败；
③因为裂解液在特殊的情况下需要20-50uL，而标准裂解是20uL处理体系，可能会有客户单独购买裂解液的需求，所以也可以单独购买。
④在您收到本产品后，打开包装，将“扩增最佳伴侣”取出放在室温，使用前看看是否有沉淀，一定要确保裂解液没有沉淀，否则按说明书在37℃溶解澄清后使用。
2、样本处理量建议：
①菌液、菌体和液体样本，推荐是10uL处理体系。
②而植物和动物组织，推荐是20uL加入1-2 mm2的样本；
③对于比较难处理的组织可以用50-100uL裂解液。
3、研磨小技巧：
① 将黄枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”，在0.2mLPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫；
② 成熟叶片或较大组织，加入50-100uL裂解液在1.5mL 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁；
③ 种子或很厚样本（杨树叶片）需要先用液氮研磨，再取少数样本加入50-100uL裂解液；
务必采用适合的研磨方式来破碎组织，让细胞充分破裂释放DNA。 （可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎）
4、建议操作步骤：
①加裂解液后，沸水浴处理3-5分钟。如果实验室没有沸水浴，也可以用PCR仪98℃处理3-5分钟。
②12000rpm离心1-2分钟，取1-2uL做PCR模板，剩余的放在-20℃保存一个月以上，以备后续再次检测。再次取出做模板时，务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2uL做PCR模板。
③本产品主要针对多糖多酚的植物样本（比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻）和动物鼠尾等样本，在沸水浴冷却到室温，加入等体积的氯仿振荡处理，然后12000rpm离心2分钟取上清，效果会有很大改善。
④PCR程序设置：把PCR延伸速度降下来，平时是5-10秒/kb， 现在要变成30-60秒/kb。因为在粗提物为模版的PCR中速度慢，好比类似在水里跑步和 陆地跑步！
⑤PCR循环数：CTAB提取的DNA纯度高，浓度大，而本产品处理的DNA模板是粗提物，循环数要比以前用CTAB模板增加2-3个循环，效果会好很多。
M5 多糖多酚双超mix（无需提取基因组DNA）说明书
| 产品名称 | 规格 | 货号 |
| M5 多糖多酚双超mix | 1 mL | MF898-01 |
| M5 多糖多酚双超mix | 10 x 1ml | MF898-10 |
| M5 多糖多酚双超mix | 100 × 1 mL | MF898-100 |
* 支持定制无染料款
【储存条件】
1、多糖多酚双超mix长期保存请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。
2、直接扩增最佳伴侣，收到后置于常温保存，如果4˚C或-20˚C保存出现结晶，请将该试剂置于37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。
【产品简介】
本产品包含聚合美特制的M5 Hiper双超mix直接扩增最佳伴侣，可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁，短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板；同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解，是各种粗样品直接PCR的必备神器，可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。
本产品包含聚合美特制Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂，浓度为2×。Best W5 HiPer High-Fidelity DNA Polymerase比普通Taq酶扩增效率高、错配率低，具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好、扩增速度快（30-60秒1kb）等优点。
可最大限度地减少人为误差，可用于高特异性PCR反应及GC含量较高（>60%）具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物是平末端，纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF021或MF022)。
本产品有含红色染料，在PCR 反应完成后，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。红色染料可指示电泳进程，其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与800 bp 双链DNA 片段相近。
【产品组份】
储存温度 MF898-01 MF898-10 MF898-100
2x M5 Hiper双超mix (with red dye) -20˚C 1 ml 10x1ml 100x1ml
M5 Hiper双超mix直接扩增最佳伴侣 常温 2 ml 10x2ml 100x2ml
Nuclease-free ddH2O 常温 1 ml 10x1ml 100x1ml
【适用范围】
1.基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。
2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物，如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析（SNP）等。
【所需试剂】
使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。
***【样本处理方法】***
A、裂解液处理组织样品时取样切勿太多：10-20uL裂解液加入1-2mm2（1-2平方毫米）大小样本为宜！
B、裂解液处理后的用做PCR模板，加入的量不要超过PCR体系的1/10。
1、菌液样品
将培养至对数生长期的菌液（酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等）以菌液和裂解液体积比1:2混合（5uL菌液：10uL最佳伴侣），直接沸水浴3-5分钟，短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。
2、平板上的菌落
用灭菌枪头挑取少量菌体，加入10 µL最佳伴侣，吹吸混匀，95 ˚C或沸水浴3-5 分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续 PCR模板。
3、血液或其他液体样品（尿液、组织液或者各种体液）
以液体样本和裂解液体积比1:2混合（5uL样本：10uL最佳伴侣），95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
4、植物组织样品（幼嫩叶片，果实、种子、根组织等）
50uL裂解液加入2-3mm2样本，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，（棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘等多糖多酚类样本，等上述样本冷却到室温加入50uL氯仿，Vortex 10秒），12000rpm离心2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
制备样本小技巧：
①、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻，冻完尽快打样)，原来怎么取样就怎么取，用钢珠怎么打样就怎么打。
②、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中，这步非常关键，完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。
③、后续就按我们推荐的95度加热5分钟，然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR。
5、动物组织样品（鼠尾、鼠耳等组织）
20uL裂解液加入2mm2样本，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，（鼠尾、鼠趾等富含胶质样本，等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿，Vortex 10秒）12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
6、 土壤等环境组织样品
20uL裂解液加入2mm2（2平方毫米）样本，将固体样品尽量研磨，95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
【PCR操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系（冰上操作）: | |
TempLate DNA（上述步骤准备） | 1-2µL |
2x M5 Hiper超光速mix (with bLue dye) | 10 μL |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 µL |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 µL |
NucLease-free ddH2O补足至 | 20 µL |
建议的PCR条件： | |
95°C | 3 min. |
32-36 *cycLes of | |
94°C | 25 sec. |
55–64°C | 25 sec. |
72°C | 30-60sec.** / kb DNA |
72°C | 5 min. |
4°C | forever |
【PCR程序设置注意事项】
* 若以粗提物为模板做PCR，因为模板量更少，PCR循环数应比用CTAB提取DNA做模板时多2-3个循环。
**若以粗提物为模板做PCR，杂质比较多，降低扩增速度有利于得到稳定结果，建议延伸60秒/1kb。
【备注】
本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。
以下为附录部分
大豆（豆科）图位克隆或转基因鉴定
细胞壁特性：纤维素、果胶、大量角质和蜡质，裂解液和高温加热能够破壁。
是否需要研磨：需要充分研磨。
选择货号：MF848。
样本选择：可考虑鉴定完毕后，再移栽阳性苗到土里！
方案1：平皿上培养2周的幼苗根组织。
①根部没有叶绿素，细胞壁特别薄，根尖的细胞密集，处理起来方便；
②大豆长出侧根后，取2-3条做鉴定不影响苗子存活；
③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。
方案2：幼嫩叶片。
细胞壁较好破碎（成熟叶片或者种子，研磨时需要更加使劲，裂解液由20µl变成50µl）
其他选择：如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法（八联排或者96孔板处理样本），一切照旧，只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液（视样本年龄和软硬程度），进行后续加热和离心操作。
处理方法：
1、采集：用镊子截取2-3条侧根，或者用打孔器或者剪刀采集2-3mm2叶片到1.5ml离心管中；
Tips：
①每采集完一个样本用清水或者75%乙醇清洗镊子、打孔器或者剪刀，然后用纸巾擦干后，方可进行第二个样本采集，以防交叉污染。
②等所有样本采集完才进行第二步操作。
③如果采用八联排管或者96孔板处理样本，请确保实验室有相应的离心设备（甩板离心机或其他离心机，需要考虑转速问题）。
2、研磨：向每个离心管加入20-50µl裂解液（视样本老嫩软硬程度），利用研磨杵，用力旋转3-5次，将根组织捣烂至裂解液变成米白色，叶片尽量捣烂至裂解液变成黄绿色；
3、加热：95 ˚C或沸水浴5分钟；
4、离心：12000rpm离心2分钟，取1-2µl作为后续PCR模板。
5、PCR程序调整：1）扩增速度1kb/分钟；2）循环数比平时扩增程序增加2-3个。
制备样本小技巧：
1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻，冻完尽快打样)，原来怎么取样就怎么取，用钢珠怎么打样就怎么打。
2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中，这步非常关键，完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。
3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟，然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR。
经典案例展示：（感谢中国农科院作物所大豆组郭勇老师供图）
M 1 2 3
1和2都是超光速mix裂解液处理，3是CTAB提取DNA做模板，同一个PCR程序
烟草、番茄、马铃薯（茄科）图位克隆或转基因鉴定
细胞壁特性：纤维素、果胶、大量角质和蜡质，细胞内含有大量多糖多酚物质，裂解液和高温加热能够破壁。
是否需要研磨：需要充分研磨。
选择货号：优先选择MF898，可以尝试MF848-AT。
片段长度：尽量不要超过500bp，如果大于500bp，请用聚合美超保真mix（MF743）。
样本选择：可考虑请鉴定完毕后再移栽阳性苗到土里！
方案1：平皿上培养2周的幼苗根组织。
①根部没有叶绿素，细胞壁特别薄，根尖的细胞密集，处理起来方便；
②长出侧根后，取2-3条做鉴定不影响苗子存活；
③鉴定完毕再移栽节省劳动力和实验室温室空间。
方案2：幼嫩叶片。
细胞壁较好破碎（成熟叶片或者种子，研磨时需要更加使劲，裂解液由20µl变成50µl）
其他选择：如果实验室已经有成熟的样本采集和磨样方法（八联排或者96孔板处理样本），一切照旧，只需在研磨完后向每个样本加入20µl-50µl裂解液（视样本年龄和软硬程度），进行后续加热和离心操作。
***【样本处理方法】***
A、裂解液处理组织样品时取样切勿太多：10-20uL裂解液加入1-2mm2（1-2平方毫米）大小样本为宜！
B、裂解液处理后的用做PCR模板，加入的量不要超过PCR体系的1/10。
1、菌液样品
将培养至对数生长期的菌液（酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等）以菌液和裂解液体积比1:2混合（5uL菌液：10uL最佳伴侣），直接沸水浴3-5分钟，短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。
2、平板上的菌落
用灭菌枪头挑取少量菌体，加入10 µL最佳伴侣，吹吸混匀，95 ˚C或沸水浴3-5 分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续 PCR模板。
3、血液或其他液体样品（尿液、组织液或者各种体液）
以液体样本和裂解液体积比1:2混合（5uL样本：10uL最佳伴侣），95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
4、植物组织样品（幼嫩叶片，果实、种子、根组织等）
50uL裂解液加入2-3mm2样本，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，（棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘等多糖多酚类样本，等上述样本冷却到室温加入50uL氯仿，Vortex 10秒），12000rpm离心2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
制备样本小技巧：
①、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻，冻完尽快打样)，原来怎么取样就怎么取，用钢珠怎么打样就怎么打。
②、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中，这步非常关键，完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。
③、后续就按我们推荐的95度加热5分钟，然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR。
5、动物组织样品（鼠尾、鼠耳等组织）
20uL裂解液加入2mm2样本，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，（鼠尾、鼠趾等富含胶质样本，等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿，Vortex 10秒）12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
6、 土壤等环境组织样品
20uL裂解液加入2mm2（2平方毫米）样本，将固体样品尽量研磨，95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
制备样本小技巧：
1、沿用实验室已有处理样本的流程(液氮速冻，冻完尽快打样)，原来怎么取样就怎么取，用钢珠怎么打样就怎么打。
2、然后尽快用牙签挑取一点打碎的样本到20ul裂解液中，这步非常关键，完全解决了因为客户采样多少带来的油多坏菜问题。
3、后续就按我们推荐的95度加热5分钟，然后12000rpm离心2分钟取1-2ul上清做PCR。
经典案例展示：（感谢华南农业大学农学院周老师课题组美亲供图）