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【产品简介】
2×M5 Hotstar plus PCR mix是由M5 Hotstar plus DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，预混好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含有的M5 Hotstar plus DNA Polymerase是一种经化学修饰的Taq DNA Polymerase，在常温下酶的活性被完全封闭，使得该酶在低温或常温下没有活性，从而有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的缓冲体系使酶的应用更为广泛，使GC含量高、二级结构复杂以及低拷贝的模板，均能高效扩增。特有的Mix配方使整个反应体系稳定性更强。用本品进行PCR扩增，PCR产物3'末端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆（请选择聚合美TOPO载体，货号MF019或MF020）。本品含蓝色染料，PCR程序结束后可以直接进行电泳操作。本产品特异性强，PCR扩增后无需胶回收去除杂带，可直接用于下游克隆或芯片杂交等实验。
【产品组份】
MF062-01 MF062-05 MF062-25
2× M5 Hotstar plus PCR mix 1ml 5×1ml 5×5ml
ddH2O 1ml 5ml 5×5ml
【适用范围】
1. 常规的PCR、RT-PCR、多重PCR和基因芯片检测。
2. 特别适用于对特异性要求较高的PCR反应。
【所需试剂】使用者仅需准备PCR反应的模板、引物和蒸馏水等。
【操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系（冰上操作）: | |
Template DNA* | <1µg |
2× M5 Hotstar plus PCR Mix | 10 μl |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 µl |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 µl |
ddH2O补足至 | 20 µl |
建议的PCR条件： | |
95°C | 10 min. |
32-40 cycles of: | |
95°C | 25 sec. |
55–65°C | 25 sec. |
72°C | 1 min/1 kb DNA |
72°C | 5 min. |
保持 4°C forever |
<*模板量：10~1000 ng 基因组 DNA，1~30 ng 质粒，或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系>。