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【储存条件】
长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。
【产品简介】
聚合美BestW5超保真DNA聚合酶具有5’ 到3’ DNA 聚合酶活性和3’ 到5’ 的外切酶活性(即校读活性)，能够纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配现象，在标准缓冲液中其保真度约相当于普通Taq DNA Polymerase的50倍、Pfu DNA Polymerase的6倍。同时该酶还具有快速的DNA合成速度，约相当于普通Taq DNA Polymerase的4-6倍、Pfu DNA Polymerase的8-12倍。该酶合成能力很强，即使是复杂的模板，也能快速准确的完成反应，尤其适用于对保真性要求高的DNA长片段的快速扩增，如基因克隆、测序、定点突变、SNP分析等，也可用于DNA片段的末端补平。使用聚合美Best W5超保真DNA聚合酶扩增得到的PCR产物无3＇端突出碱基，不可直接用于TA克隆，可以直接连入聚合美特制的平末端TOPO克隆载体（货号MF021和MF022）。
【单位定义】
用大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74˚C、30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物所需的酶量。
【产品组份】
MF748-01 MF748-05
Best W5 High-Fidelity DNA Polymerase (2U/μl) 50 μl 5x50ul
5× HF PCR Buffer 1.0 ml 5x1.0 ml
5× GC PCR Buffer 1.0 ml 5x1.0 ml
【质量控制】
以λ DNA为模板，能有效扩增20 kb的DNA片段；以基因组DNA为模板，能有效扩增单拷贝基因；无内切酶和外切酶污染。
【适用范围】
高保真扩增，长片段的快速扩增，如基因克隆、定点突变等；高GC含量、具有二级结构的复杂模板的扩增。
【操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系: | |
5× HF PCR Buffer | 10 μl |
10mM dNTPs | 1 µl |
Primer 1 (10 μM) | 2.5 µl |
Primer 2 (10 μM) | 2.5 µl |
Template DNA* | 10-200ng |
Best W5 High-Fidelity DNA Polymerase | 0.5µl |
ddH2O补足至 | 50 µl |
建议的PCR条件： | |
98°C | 30sec.-3 min. |
30-35 cycles of: | |
98°C | 5-10 sec. |
50–64°C | 10-30sec. |
72°C | 10-15sec./1kb |
72°C | 5 min. |
4°C | forever |
<*模板量：10~200 ng 基因组 DNA，10~30 ng 质粒，或 1~2 μl RT-PCR 反应后的 cDNA。以上举例为常规 PCR 反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系>。
1）本产品的5×HF 和5×GC Buffer中含有7.5 mM镁离子；
2）对于复杂模板或高GC含量的模板，建议使用5×GC Buffer。