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M5 核糖核酸酶 H（RNase H）
【储存条件】长期保存，请置于-20˚C，有效期 24 个月。
【产品简介】
RNase H 是一种核酸内切酶，可特异性地水解与 DNA 杂交的 RNA 的磷酸二酯键，产生具有游离 5’-P 和 3’-OH 末端的产物。该酶不能降解单链核酸、双链 DNA 或双链 RNA。用于 cDNA 第二链合成前去除 mRNA，DNA-RNA 杂交体的鉴定，在 Oligo(dT) 存在下去除 mRNA 的 poly(A)尾。
【单位定义】
一个活性单位(U)定义为：以 Poly(rA)•Poly(dT)为底物，在 30°C、pH7.7 的条件下，20 分钟内产生 1 nmol 酸可溶性物质所需要的酶量定义为 1 个活性单位(U)。
【产品组份】
RNase H (60 U/μl) 10 μl5x RNase H Buffer 300 μl5 x RNase H Buffer 成分：500 mM TrisCl (pH 8.3 at 25°C)，30 mM MgCl2，750 mM KCl，100 mM DTT
【操作步骤】
以除去 DNA-RNA 杂合体中的 RNA 为例：用户需自备的试剂：DEPC-ddH2O (货号 MF160-plus-01)，3 M NaOAc (pH5.2)，无水乙醇，70％乙醇。
操作步骤：
1. 在一无菌离心管中配制以下反应液：DNA-RNA 杂合体 0.5~5 μg5x RNase H Buffer 10 μlRNase H (60 U/μl) 1 μlDEPC-ddH2O 补足至 50 μl
2. 30°C 反应 1 小时。
3. 加入 5 μl 的 3 M NaOAc (pH5.2)。
4. 加入 125 μl 的预冷无水乙醇，-20°C 放置 30~60 分钟。
5. 离心回收沉淀，用预冷的 70％乙醇清洗沉淀，真空干燥后备用。