伴随高通量测序的高速发展,后基因组时代的到来,功能基因的可变剪接逐渐成为目前研究的热点。可变剪接的存在,之前仅根据NCBI的功能基因序列设计引物,并进行荧光定量已经不那么精确,只有荧光定量之前,先做RACE,才能精准分析功能基因及其可变剪切的表达。聚合美三款RACE试剂盒,开启您可变剪接研究之路。
关于RACE:
1.cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)。
2.是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5‘和3’末端的有效方法,用来克隆新基因。
3.经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术,主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA 5‘ 和3’ 端,包括单边PCR和锚定PCR,获得完整的cDNA。
为什么要做RACE?
l 通常cDNA的合成方法均通过逆转录酶(反转录)将mRNA反转录成第一链的单链cDNA。受限于反转录的效率,基因的5'端在反转录过程中常常不能被转录,最终形成的cDNA的5'端通常并不完整。
l 在基因序列较长、mRNA连续出现二级结构,特别是仅以oligo(dT)引物合成第一链cDNA的情况下,5'端cDNA链合成截短的现象尤为突出。
l 以未降解的RNA构建的cDNA文库中,出现的截短的cDNA的分子常因反转录过程异常终止所致。但无论如何,HIPER™方法能够优先富集的全长cDNA片段。
聚合美RACE试剂盒
聚合美开发出分别针对动物、植物、病毒样本的试剂盒,在研发方面,我们有四大革新技术:
一、国内首款基于SMARTer原理的RACE试剂盒
- 稳定实现批量的基因全长克隆结果
- 更容易获得功能基因的可变剪接
二、独特的反转录体系
- 同一体系和反应过程内实现反转录和接头添加。
- 在cDNA3末端加6-7个C,增加反转录和接头引物的跳转效率。
三、5´跳转引物的合成方式
- 特殊的跳转引物修饰方式既可增加mRNA 5΄端的跳转效率,更易获得5΄端全长。还能实现试剂盒的4 ℃运输和-20℃贮存,大大降低了试剂的运输、贮存成本。
四、引物体系
- 3套反转录引物(动物、植物、带polyA尾的病毒);两端接头引物序列不同,避免了因接头引物单引物自扩增,产生非特异性扩增产物的风险。
RACE试剂盒产品优势:
1.第一链cDNA可直接用于5‘和3’PCR,无需第二链cDNA合成和接头连接
2.在样本很小的情况下,显著降低非特异性的扩增
3.避免了接头连接,直接使用cDNA作为模板,降低了RACE复杂性,缩短至4个小时
4.对PCR过程也进行了优化,增加RACE反应的灵敏性的同时降低了试验背景
总结:只需单一PCR管和两步法的程序完成合成cDNA,其他品牌RACE方法均因扩增的高背景和截短的5 '末端而存在明显的劣势。
聚合美RACE试剂盒系列产品
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 |
MF670-P-01 | M5 HiPer RACE cDNA Synthesis Kit for Plant (5'和3‘RACE都可以做)植物专用 | 10T | 9598 |
MF670-A-01 | M5 HiPer RACE cDNA Synthesis Kit for Animal (5'和3‘RACE都可以做)动物专用(昆虫等) | 10T | 8998 |
MF670-V-01 | M5 HiPer RACE cDNA Synthesis Kit for Virus (5'和3‘RACE都可以做)病毒专用 | 10T | 8798 |