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2X Dual SYBRgreen Realtime PCR Super Mix
（双封闭法，Rox预混）使用说明书
| 品名 | 单位 | 货号 |
| 2X Dual SYBRgreen RealtimePCR Super Mix | 1mL*5支 | MF013-plus-01 |
| 2X Dual SYBRgreen RealtimePCR Super Mix | （1mL*5支）x5 | MF013-plus-05 |
| 2X Dual SYBRgreen RealtimePCR Super Mix | （1mL*5支）x10 | MF013-plus-10 |
【储存条件】
长期保存，请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。
【产品简介】
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行实时荧光定量PCR的专用2×浓度预混液。利用聚合美特异的新型双封闭HotStart Taq DNA Polymerase抑制在常温下Taq酶的聚合酶活性，从而抑制在低温条件下出现的由引物和模板DNA非特异性杂交或引物二聚体引起的非特异性扩增。特异的双阳离子缓冲液，增强特异性，减少引物二聚体的形成，使得结果更加准确可靠。优化浓度的SYBR Green I 荧光染料，特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中SYBR Green I染料分子荧光信号不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步，荧光可以在退火或延伸阶段测定。
【产品组份】
新型双封闭HotStart Taq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+、ROX、反应缓冲液、稳定剂和增强剂。
【适用范围】
主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的定量检测。本品具有高通用性，可用于各种仪器。因产品中已经添加了ROX Reference Dye，因此可以用于需要校正荧光信号的仪器（如ABI Prism7000/7300/7700/7900HT和ABI Step One /ABI Step One Plus荧光定量PCR仪）。也可以用于Roche LightCycler等各种荧光定量PCR仪上采用SYBRGreen法进行基因表达分析和核酸检测等实验。
【所需试剂】
本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。
【操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系: | |
Template DNA | X* µl |
2X Dual SYBRgreen Realtime PCR Super Mix | 10 μl |
Primer 1 (10μM) | 0.5 µl |
Primer 2 (10μM) | 0.5 µl |
ddH2O补足至 | 20 µl |
建议的PCR条件: | |
95°C | 30-60 sec. |
35-40 cycles of: | |
95°C | 15 sec. |
55–65°C | 15 sec. |
72°C | 30-60 sec*. |
*一般情况下目标片段在300bp以下时，延伸时间30秒即可，但一部分仪器，为测定稳定的荧光，延伸时间需要大于30秒。扩增曲线散乱，或者各孔间差异较大时，请设定较长的延伸时间（45-60秒）。 | |
*:10~100 ng基因组 DNA ，或1~10 ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。另外two Step RT PCR反应的 cDNA （RT 反应液）作为模板时的添加量不要超过PCR反应液总体积的10% 。
【注意事项】
1. 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
2. 尽可能减少在光下的曝露时间，长时间的曝光可导致荧光信号强度的丧失。本品不能用于杂交探针法。