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M5 Blood Genomic DNA Mini Kit withcolumns (0.1-1ml) 使用说明书
产品名称 | 单位 | 货号 |
M5 Blood Genomic DNA Mini Kit with columns (0.1-1ml) | 50T | MF061-01 |
M5 Blood Genomic DNA Mini Kit with columns (0.1-1ml) | 200T | MF061-04 |
【储存条件】
本试剂盒常温运输（蛋白酶 K 可以常温运输）。为了保证长期使用，建议收到本试剂盒后将蛋白酶 K 于-20℃保存，其他组分室温（15 ~ 25℃）保存。
【产品内容】
产品成分 | MF061-01 | MF061-04 | |
Buffer GB | 12 ml | 45 ml | |
Buffer WB1 | 30 ml | 110 ml | |
Buffer WB2 | 15 ml | 2×30 ml | |
Buffer EB | 10 ml | 30 ml | |
Proteinase K | 1 ml | 4×1 ml | |
Spin Column With Collection Tubes 50 | 200 | ||
【自备试剂】
无水乙醇、RNase A（可选）
【产品简介】
本试剂盒适用于各种新鲜及抗凝剂（柠檬酸钠、EDTA 等）处理过的全血基因组 DNA 提取。无需去除红细胞，直接裂解血细胞，DNA 特异吸附到硅胶膜上，通过简单漂洗去除杂质，可快速纯化得到基因组 DNA。使用本试剂盒得到的血液基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染，可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
产品特点。
1. 适用范围广：可从抗凝血、白膜层和禽类血等样品中直接提取DNA；
2. 操作简便：无需有机试剂沉淀，可快速获得高纯度的血液基因组DNA；
3. 纯度高：去除污染物和抑制剂彻底，便于下游应用。
【注意事项】
1. 如Buffer GB 和 BufferWB1 产生沉淀，可在 56℃水浴溶解；
2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段小，提取量下降；
3. 所有离心步骤均为台式离心机，室温下操作。
北京市昌平区回龙观龙域北街 10 号院 1 号楼四层 422-1 室（创集合大楼） 热线电话：（86）010-59724297
北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd
【操作步骤】
1. 在1.5 ml 灭菌离心管中加入 20 ulProteinase K，200 ul 鲜血或抗凝血，振荡混匀。
注意：如要去除 RNA，可加入 4 ul RNase A (100 mg/ml)，混匀，静置5 min
2. 加入200 ul Buffer GB，涡旋混匀15 sec。
3. 56℃水浴或金属浴 10 min，期间每隔一段时间震荡离心管，至溶液变得清亮后短暂离心，以去除管盖内壁的液体。
4. 加入200 ul 无水乙醇，充分震荡，短暂离心以去除管盖内壁液体。
5. 将吸附柱放入收集管，将上一步所得溶液全部加入吸附柱中，12,000rpm 离心 1 min，弃收集管中滤液。
6. 向吸附柱内加入500 ul Buffer WB1，室温12,000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中滤液。
注意：Buffer WB1 中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。
7. 向吸附柱内加入500 ul Buffer WB2，室温12,000 rpm 离心 30 sec，弃收集管中滤液。
注意：Buffer WB2 是浓缩液，按要求加入无水乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发。
8. 重复步骤7 一次。
9. 室温12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留液体。
注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响基因组 DNA 的后续使用。
10. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml 塑料离心管中，加入 50 ~ 100ul Buffer EB，室温放置 2 min。10,000 rpm 离心2 min，离心管底溶液即血液基因组 DNA。
注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间，为了增加基因组 DNA 的回收率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置 2 min，再次离心收集。