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M5 Blood Genomic 96 Kit 血液基因组
96 孔板提取试剂盒使用说明书
产品名称 | 单位 | 货号 |
M5 Blood Genomic 96 Kit | 4x96T | MF316-01 |
【储存条件】
Buffer RCL 2-8℃，其他组分室温（15-30℃）。
【产品简介】
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血(带有抗凝血剂，如柠檬酸盐、EDTA 或肝素等)、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中的总 DNA，包括基因组 DNA，线粒体 DNA 及病毒 DNA。本试剂盒广泛的应用于临床样品的检测，可以同时处理 96 个样品，采
用96 孔吸附板可以特异性吸附结合 DNA，经过纯化的 DNA 产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于 PCR、Real-Time PCR、酶切和 Southern Blot 等实验。
【产品组分】
Buffer RCL | 2×500 ml |
Buffer GR | 2×50 ml |
Buffer GL | 2×50 ml |
Buffer GW1（concentrate） | 2×52 ml |
Buffer GW2（concentrate） | 2×50 ml |
Buffer GE | 60 ml |
Proteinase K | 90 mg |
Proteinase K Storage Buffer | 2×5 ml |
Bind 96 Plateswith Collection Plates（4 | 1 |
Collection Plates（4） | 2 |
Sealing Films | 16 |
【自备试剂】
无水乙醇。
【注意事项】
1．向Proteinase K 中加入 9 mlProteinase K Storage Buffer 使其溶解，-20℃保存。配制好的 Proteinase K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量也下降。
3．第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1 和 BufferGW2 中加入无水乙醇。
4．使用前请检查 Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL 于 56℃水浴重新溶解。
5．实验前配制Buffer GL 与Proteinase K 的混合溶液，每200 μl Buffer GL 中加入20 μl Proteinase K，该溶液最好现用现配，在使用前配制时间最多不超过1 小时。
6．使用排枪时注意不要打湿96 孔板孔口，以防止离心过程中有液体溅出产生交叉污染。
北京市昌平区回龙观龙域北街 10 号院 1 号楼四层 422-1 室（创集合大楼） 热线电话：（86）010-59724293
北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd
【操作步骤】
1．样本处理：
1a.将 200 μl 样本加到收集板（Collection Plate）中。不足 200 μl 的样本，加 Buffer GR 补足至 200 μl。
1b.样本超过 200 μl，且不超过 600 μl 时，将血液样本加到收集板中，加入样本 2 倍体积的 Buffer RCL，吹打 20 次混匀，加盖新的封板膜（Sealing Film），3,600 rpm （~1,200×g）离心 10 分钟。揭去封板膜，吸弃上清（可留下 100 μl 液体以避免吸到细胞沉淀）。再加入样本 2 倍体积的 Buffer RCL，吹打 10-20 次混匀，加盖新的封板膜，3,600 rpm 离心 10 分钟。揭去封板膜，吸弃上清，剩余约 200 μl 液体。
注意：1）在收集板上做好标记，以方便后续实验对样品的辨识。
2）如果样品为鸟类的血液，建议样品用量少于 10 μl。
2．配制 Buffer GL 与 Proteinase K 的混合溶液：按照 200 μl Buffer GL 中加入 20 μl Proteinase K 的比例配制，混匀。
3．向每孔中加入 220 μl Buffer GL 与 Proteinase K 的混合溶液，吹打 20 次，混匀。加盖新的封板膜，短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
4．56℃孵育 10 分钟。
注意：孵育 10 分钟 DNA 的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对 DNA 产量和纯度没有影响。
5．揭去封板膜，加入 200 μl 无水乙醇，吹打 20 次，混匀。短暂离心，使管壁和管盖上的液体集中到管底。
6．将步骤 5 所得溶液全部加入到已装入收集板的吸附板（Bind 96 Plate）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。3,600 rpm 离心
5 分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
7．向吸附板每孔加入 500 μl Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇），3,600 rpm 离心 5 分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
8．向吸附板每孔加入 500 μl Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇），3,600 rpm 离心 5 分钟。倒掉收集板中的废液，将吸附板重新放回收集板中。
9．3,600 rpm 离心 10 分钟，倒掉收集板中废液。将吸附板置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附板中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)
10．将吸附板置于一个新收集板中，向吸附板每孔中间部位悬空加入 80-200 μl Buffer GE 或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，3,600 rpm 离心 10 分钟，收集 DNA 溶液，加盖新的封板膜。-20℃保存 DNA。
注意：1) 如果下游实验对 pH 值或 EDTA 敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)，pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。
2) 离心之前室温孵育 5 分钟可以增加产量。
3) 因为保存在水中的 DNA 会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用 Buffer GE 洗脱并于-20℃保存。