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M5 Swab Genomic DNA Kit 使用说明书

【储存条件】

室温保存

【试剂盒组分】

【产品简介】

本试剂盒提供一种简单快速分离纯化口腔拭子样本总 DNA 的方法。该试剂盒采用可特异性结合 DNA 的硅基质膜和独特的缓冲系统，高效专一吸附 DNA，每个拭子可得到 0.5-3.5 μg 基因组 DNA，提取的 DNA 片段大、纯度高、质量稳定可靠。适用于酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。

【产品特色】

·采用硅基质膜原理，简单、快速从口腔拭子中提取基因组 DNA；

·提取的基因组 DNA 片段大、纯度高；

·单个拭子样本得率达到 0.5-3.5 μg。

【自备试剂】

无水乙醇。

【实验前准备及注意事项】

1．向Proteinase K 中加入指定用量（MF058-01 加入 1.25ml； MF058-04 加入 5ml）的 Proteinase K Storage Buffer 使其溶解，-20˚C保存。配制好的 Proteinase K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2．第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入无水乙醇。

3.   使用前若发现 Buffer GL 有沉淀，请将 Buffer GL 放于 56˚C 水浴溶解。

4.   所有离心操作均在室温下完成。

5．取样：使用口腔拭子在口腔内壁擦拭 6 次，晾干 2 小时保存，为确保样本不被食物或饮料污染，取样前 30 分钟内请勿进食和饮水。

【操作步骤】

1．将口腔拭子的棉签用剪刀从杆上剪下，置于 2ml 的离心管（自备）中，加入 400µl Buffer GR。

注意：如需无 RNA 污染的基因组 DNA，可加入 4µl 浓度为 100mg/ml 的 RNase A 溶液，振荡混匀。

2．加入 20µl Proteinase K 和 400µl Buffer GL，立即涡旋振荡 15 秒，充分混匀。

注意：加入 Buffer GL 后立即充分混匀；不可将 Proteinase K 直接加入 Buffer GL 中使用。

3．56˚C 放置 10 分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

4．加入 400µl 无水乙醇，涡旋混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。

5．将上步所得溶液和沉淀分两次加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DS），一次最多不超过700µl。12,000 rpm（大约13,400xg）离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

6．向吸附柱中加入500µl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7．向吸附柱中加入500µl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 3 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如需进一步提高 DNA 纯度，可以重复步骤 7。

8．12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

9．将吸附柱置于一个新的 1.5ml 离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50µl Buffer GE或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液，-20˚C 保存。

注意：1）如果下游实验对 pH 值或 EDTA 敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围），pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。

2）若需长期保持，推荐用 Buffer GE 洗脱并于-20˚C 保存。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。