- 产品详情
- 产品参数
- 产品评论
M5 FTAcard DNA Kit 血片基因组 DNA
提取试剂盒使用说明书
产品名称 | 单位 | 货号 |
M5 FTAcard DNA Kit | 50T | MF067-01 |
【储存条件】
室温保存
【试剂盒组分】
MF067-01 | |
Buffer GTL | 15ml |
Buffer GC | 15ml |
Buffer GW1 (concentrate) | 13ml |
Buffer PW2 (concentrate) | 18ml |
Buffer GE | 15ml |
Proteinase K | 25mg |
Proteinase K Storage Buffer | 1.25ml |
Spin Columns DC with | |
Colletion Tubes | 50 |
【产品简介】
本试剂盒供了一种快速、简单、高效的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液，也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后，DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后，高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶抑制剂和其他杂质的残留。DNA最长可达50 kb，适用于PCR，Real-time PCR、Southern blotting等实验。
【自备试剂】
无水乙醇
【实验前准备及注意事项】
1．向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20˚C保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，避免反复冻融，以免影响其活性。
2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
3．使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GC和Buffer GTL于56˚C水浴重新溶解
4．将一个水浴锅预热至56˚C，另一个水浴锅预热至70˚C。
5．可将洗脱缓冲液 Buffer GE 预热至 70˚C。
【操作步骤】
1．向1.5 ml离心管中加入20 μl Proteinase K溶液，然后再加入180 μl Buffer GTL。
注意：若样品数量较多，Proteinase K和Buffer GTL可按比例混合，然后将200 μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
北京市昌平区回龙观龙域北街 10 号院 1 号楼四层 422-1 室（创集合大楼） 热线电话：（86）010-59724293
北京聚合美生物科技有限公司 Mei5 Biotechnology, Co., Ltd
2．将取下的干血片放入上一步中的离心管中，剧烈涡旋混匀并短暂离心。56˚C孵育30-60分钟，期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3．加入200 μl Buffer GC，彻底涡旋混匀。短暂离心后，70˚C孵育10分钟，期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意：加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀，大部分情况下，在孵育过程中，沉淀会消失，沉淀不会影响后续的实验。
4．待步骤3离心管中样品降为室温后加入100 μl无水乙醇，轻轻颠倒混匀样品，室温放置5分钟。短暂离心，将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意：1）需要将样品和乙醇混合均匀。
2）当室温高于25˚C时，需要先将乙醇预冷。
5．将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns DC)中，12,000 rpm（~13,400×g）离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将Spin Column DC放回收集管中。
6．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入500 μl Buffer PW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8．重复步骤7。
9．12,000 rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置2-5分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。
10.将吸附柱置于一个无菌的1.5 ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100 μlBuffer GE，室温放置2-5分钟。12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20˚C保存DNA。
注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2）离心前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的20-200 μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置5 min后再次离心； 若洗脱体积小于20 μl， 可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer GE或去离
子水洗脱。
4）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20˚C保存。