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M5 Plant Genomic DNA Kit 使用说明书

【储存条件】

室温保存

【试剂盒组分】

【产品简介】

本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，适合从各种不同的新鲜或冻存植物组织中提取基因组DNA，并可最大限度去除植物组织中的杂质。本试剂盒无需使用酚/氯仿抽提，操作安全。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠，适用于 PCR、荧光定量 PCR、分子标记、文库构建等实验。

【自备试剂】

无水乙醇。

【实验前准备及注意事项】

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer LP3 (MF070-01应该加27ml无水乙醇，MF070-04应该加108ml无水乙醇)和Buffer

GW2 (MF070-01应该加35ml无水乙醇，MF070-04应该加175ml无水乙醇)中加入无水乙醇。使用前请检查Buffer LP1和Buffer LP2是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer LP1和Buffer LP2于56˚C水浴重新溶解。

【操作步骤】

1．取植物新鲜组织100 mg左右或干重组织约20 mg，加入液氮充分研磨。

2．将研磨后的粉末收集到离心管（自备）中，加入400 μl Buffer LP1和6 μl RNase A（10 mg/ml），涡旋振荡1分钟，室温放置10分钟，使其充分裂解。

注意：1）使用涡旋振荡或移液器吹打，充分裂解组织，组织裂解不完全会影响最终的DNA得率。

2）请勿在使用前将Buffer LP1与RNase A混合。

3．加入130 μl Buffer LP2，混匀，涡旋震荡1分钟。

4．12,000 rpm（~13,400×g）离心5分钟，将上清移至新的离心管（自备）中。

5．加入1.5倍体积的Buffer LP3（使用前检查是否已加入无水乙醇），充分混匀（如500 μl滤液加入750 μl Buffer LP3）。

注意：加入Buffer LP3后应立即混匀，可能会产生沉淀但不影响后续实验。

6．将上步所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

7．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

注意：如吸附膜呈现绿色，向吸附柱中加入500 μl无水乙醇，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

8．重复步骤7.

9．12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。

10.将吸附柱放到一个新离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μlBufferGE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm 离心1分钟，收集DNA溶液。-20˚C保存DNA。

注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。

2）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于100 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少DNA的总产量。如果所得DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer GE进行洗脱。

4）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20˚C保存。

【备注】

本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。