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M5 Mouse Tail Genomic DNA Kit
鼠尾基因组 DNA 提取试剂盒使用说明书
产品名称 | 单位 | 货号 |
M5 Mouse Tail Genomic DNA Kit | 50T | MF315-01 |
【储存条件】
常温运输，室温（15~30˚C）保存。
【产品简介】
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总 DNA。该试剂盒提供的方法简单易行，纯化过程无需苯酚或氯仿抽提，可获得最大为 50 kb 的 DNA 片段，同时对 100 bp 的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液，有效裂解鼠尾样本，优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的 DNA 高效结合到硅基质吸附柱上，而其他污染物可流过膜；PCR 和其他酶促反应的抑制剂可通过两
步洗涤步骤被有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度的 DNA。纯化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
【产品组份】
50T | |
Buffer GTT | 15 ml |
Buffer GL | 15 ml |
Buffer GW1 (concentrate) | 13 ml |
Buffer GW2 (concentrate) | 15 ml |
Buffer GE | 15 ml |
Proteinase K | 25mg |
Proteinase K Storage Buffer | 1.25ml |
Spin Columns DM | |
With Collection Tubes | 50 |
【自备试剂】
无水乙醇
【实验准备】
1．向 Proteinase K 中加入 1.25 ml Proteinase K Storage Buffer 使其溶解，-20˚C 保存。
配制好的 Proteinase K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。
3．第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在 Buffer GW1 和 Buffer GW2 中加入无水乙醇。
4．使用前请检查 Buffer GL 是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀， Buffer GL 于 56˚C 水浴重新溶解。
【操作步骤】
1．取一段大鼠或两段小鼠长度为 0.4-0.6 cm 的尾巴，在液氮中研磨成细粉或剪碎放入离心管（自备）中。加入 180 μl Buffer GTT，振荡混匀。
注意：确保组织的起始量不要超出推荐范围。
2．加入 20 μl Proteinase K，涡旋振荡，彻底混匀。
3．置于 56℃水浴，直至组织溶液完全清澈，一般情况下需要消化 6-8 小时，孵育过程中涡旋震荡，使样品均匀分散。
注意：1）如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化或再加入 20 μl Proteinase K 消化，不会影响后续操作。
2）如需去除 RNA，在上述步骤完成后加入 4 μl 100 mg/ml 的 RNase A 溶液，震荡混匀，室温放置 5-10 分钟。
4．12,000 rpm (~13,400×g)离心 1 分钟，以除掉未消化的类似于鼠毛等组织。将上清转移到一个新的离心管（自备）中。
5．加入 200 μlBuffer GL，涡旋震荡，充分混匀。加入 200 μl 无水乙醇，涡旋震荡，充分混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：1）加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2）如果多个样品一起操作，Buffer GL 和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3）加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
6．将步骤 5 中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8．向吸附柱中加入 500 μl Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心 1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高 DNA 纯度，可重复步骤 8。
9．12,000 rpm 离心 2 分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应（酶切、PCR 等）。
10．将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空加入 50-200 μl Buffer GE 或灭菌水，室温放置 2-5 分钟，
12,000 rpm 离心 1 分钟，收集 DNA 溶液，-20℃保存 DNA。
注意：1）如果下游实验对pH 值或 EDTA 敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的 pH 值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5（可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围），pH 值低于 7.0 时洗脱效率不高。
2）离心之前室温孵育 5 分钟可以增加产量。
3）用另外的 50-200 μl Buffer GE 或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4）如果要提高 DNA 的终浓度，可以将步骤 10 所得的 DNA 洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤 10；若洗脱体积小于 200 μl，可以增加DNA 的终浓度，但可能会减少总产量。如果 DNA 的量小于 1 μg，推荐用 50 μl Buffer GE 或灭菌水洗脱。
5）因为保存在水中的 DNA 会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用 Buffer GE 洗脱并于-20℃保存。