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超光速mix （MF848）使用“温馨提示”：
一、产品说明：
根据不同物种的基因组GC/AT含量不同，我们设置了几种2x PCRmix以完成实验。
对于常见GC含量均衡物种推荐MF848系列；
而对于松树、杨树、棉花、黄瓜等基因组GC含量比较低，推荐MF848-AT；
某些海洋生物GC含量非常高，推荐MF848-GC。
MF848、MF848-AT、MF848-GC三者唯一的区别就是2x PCR mix不同，其他组分和操作都相同。
MF848-01 | M5 超光速mix（鼠尾，昆虫，拟南芥，水稻，玉米，小麦等） | 1mL |
MF848-10 | 10x1mL | |
MF848-100 | 100x1mL | |
MF848-AT-01 | M5 高AT物种超光速mix（特指番茄，土豆，棉花，黄瓜，杨树，松树等） | 1mL |
MF848-AT-10 | 10x1mL | |
MF848-AT-100 | 100x1mL | |
MF848-GC-01 | M5 高GC物种超光速mix（特指褐藻，小球藻等） | 1mL |
MF848-GC-10 | 10x1mL | |
MF848-GC-100 | 100x1mL |
二、超光速mix （MF848）组成：
裂解液叫“扩增最佳伴侣”（MF859）
2x PCRmix
ddH2O
三、组分说明与操作建议
本产品免基因组DNA提取：“扩增最佳伴侣”的作用是裂解细胞，释放出DNA当模板（请摸索最适合您实验的最佳伴侣和样本的比例关系.
Tips：
样本太多：会超出最佳伴侣的处理上限，导致裂解不完全；
样本太少：会造成模板浓℃过低，导致PCR失败；
因为裂解液在特殊的情况下需要20-50uL，而标准裂解是20uL处理体系，可能会有客户单独购买裂解液的需求，所以也可以单独购买。
在您收到本产品后，打开包装，将“扩增最佳伴侣”取出放在室温，使用前看看是否有沉淀，一定要确保裂解液没有沉淀，否则按说明书在37℃溶解澄清后使用。
样本处理量建议：
菌液、菌体和液体样本，推荐是10uL处理体系。
而植物和动物组织，推荐是20uL加入1-2 mm2的样本；
对于比较难处理的组织可以用50-100uL裂解液。
3、研磨小技巧：
① 将黄枪头用火灼烧融化成自制的“研磨杵”，在0.2mLPCR管中研磨幼嫩组织或者昆虫；
② 成熟叶片或较大组织，加入50-100uL裂解液在1.5mL 离心管中用研磨杵旋转挤压破壁；
③ 种子或很厚样本（杨树叶片）需要先用液氮研磨，再取少数样本加入50-100uL裂解液；
务必采用适合的研磨方式来破碎组织，让细胞充分破裂释放DNA。
（可以通过看裂解液的颜色来判断是否充分破碎）
加裂解液后操作步骤：
沸水浴处理3-5分钟，如果实验室没有沸水浴，也可以用PCR仪98℃处理3-5分钟。
12000rpm离心1-2分钟，取1-2uL做PCR模板，剩余的放在-20℃保存一个月以上，以备后续再次检测。再次取出做模板时，务必12000rpm离心1-2分钟才能取上清1-2uL做PCR模板。
对于多糖多酚的植物样本（比如棉花、烟草、番茄、杨树和一些海藻）和动物鼠尾等样本，在沸水浴冷却到室温，加入等体积的氯仿振荡处理，然后12000rpm离心2分钟取上清，效果会有很大改善。
M5 超光速mix（无需提取基因组DNA）使用说明书
产品名称 单位 货号
M5 超光速mix 1 mL MF848-01
M5 超光速mix 10×1 mL MF848-10
M5 超光速mix 100×1 mL MF848-100
【储存条件】
超光速mix长期保存请置于-20˚C，有效期24个月。经常使用，可置于4˚C保存至少六个月。
直接扩增最佳伴侣，收到后置于常温保存，如果4˚C或-20˚C保存出现结晶，请将该试剂置于
37℃水浴中重新溶解后摇匀使用。
【产品简介】
本产品包含聚合美特制的M5 Hiper光速mix直接扩增最佳伴侣，可以迅速裂解酵母、农杆菌、革兰氏阳性菌、放线菌等微生物的细胞壁，短暂煮沸后的液体可以直接作为PCR模板；同样可以用于动植物组织细胞样品的裂解，是各种粗样品直接PCR的必备神器，可兼容普通Taq酶或高保真酶的下游PCR扩增。
本产品包含高纯℃M5 Hiper PLus Taq HiFi DNA聚合酶、dNTPs、MgCL2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂、优化剂以及稳定剂，浓℃为2×。M5 Hiper PLus Taq HiFi DNA 聚合酶比普通Taq酶扩增效率高、错配率低，具有快速简便、灵敏℃高、特异性强、稳定性好、扩增速℃快（30-60秒1kb）等优点。可最大限℃地减少人为误差，可用于高特异性PCR反应及GC含量较高（>60%）具有二级结构等复杂模板的扩增和大规模基因检测。PCR 产物的3’端附有一个突出的"A"碱基，纯化后可直接用于TA 载体克隆(货号MF019或MF020)。 本产品有含蓝色染料，在PCR 反应完成后，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。蓝色染料可指示电泳进程，其迁移速℃在1% TAE琼脂糖凝胶中与500 bp 双链DNA 片段相近。
【产品组份】
储存温℃ MF848-01 MF848-10 MF848-100
2x M5 Hiper超光速mix (with bLue dye) -20˚C 1 mL 10x1mL 100x1mL
M5 Hiper超光速mix直接扩增最佳伴侣 常温 2 mL 10x2mL 100x2mL
NucLease-free ddH2O 常温 1 mL 10x1mL 100x1mL
【适用范围】
1.基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测、半定量PCR实验和微量DNA的检测。
2.用于从复杂模板中如基因组等扩增PCR产物，如表达基因的克隆、基因的定点突变和细胞内基因点突变的分析（SNP）等。
【所需试剂】
使用者仅需准备PCR反应的模板和引物等。
【样本处理方法】
裂解液处理组织样品时取样切勿太多：10-20uL裂解液加入1-2mm2（1-2平方毫米）大小样本为宜！
B、裂解液处理后的用做PCR模板，加入的量不要超过PCR体系的1/10。
1、菌液样品
将培养至对数生长期的菌液（酵母、革兰氏阳性菌、农杆菌、放线菌培养液等）以菌液和裂解液体积比1:2混合（5uL菌液：10uL最佳伴侣），直接沸水浴3-5分钟，短暂离心后取1-2µL作为后续PCR模板。
2、平板上的菌落
用灭菌枪头挑取少量菌体，加入10 µL最佳伴侣，吹吸混匀，95 ˚C或沸水浴3-5 分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续 PCR模板。
3、血液或其他液体样品（尿液、组织液或者各种体液）
以液体样本和裂解液体积比1:2混合（5uL样本：10uL最佳伴侣），95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
4、植物组织样品（幼嫩叶片，果实、种子、根组织等）
20uL裂解液加入2mm2样本，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，（棉花、烟草、杨树、番茄、柑橘等多糖多酚类样本，等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿，Vortex 10秒），12000rpm离心2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
5、动物组织样品（鼠尾、鼠耳等组织）
20uL裂解液加入2mm2样本，将固体样品尽量研磨，煮沸3-5分钟，（鼠尾、鼠趾等富含胶质样本，等上述样本冷却到室温加入20uL氯仿，Vortex 10秒）12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
6、 土壤等环境组织样品
20uL裂解液加入2mm2（2平方毫米）样本，将固体样品尽量研磨，95 ˚C或煮沸3-5分钟，12000rpm离心1-2分钟，取1-2µL作为后续PCR模板。
【PCR操作示例】 | |
按下表配制PCR反应体系（冰上操作）: | |
TempLate DNA（上述步骤准备） | 1-2µL |
2x M5 Hiper超光速mix (with bLue dye) | 10 μL |
Primer 1 (10 μM) | 0.5 µL |
Primer 2 (10 μM) | 0.5 µL |
NucLease-free ddH2O补足至 | 20 µL |
建议的PCR条件： | |
95°C | 3 min. |
32-36 *cycLes of | |
94°C | 25 sec. |
55–64°C | 25 sec. |
72°C | 30-60sec.** / kb DNA |
72°C | 5 min. |
4°C | forever |
【PCR程序设置注意事项】
* 若以粗提物为模板做PCR，因为模板量更少，PCR循环数应比用CTAB提取DNA做模板时多2-3个循环。
** 若以粗提物为模板做PCR，杂质比较多，降低扩增速度有利于得到稳定结果，建议延伸速℃60秒/1kb。
【备注】
本产品仅供科研使用。在确认产品质量出现问题时，本公司承诺为客户免费更换等量的质量合格产品。